Bir araştırmacı, şüpheli bir lenfoma vakasında genomik 'daki belirli bir gen düzenlenmesini (rearrangement) saptamak amacıyla Southern Blotting yöntemini kullanmaya karar verir. İşlem sırasında, elektroforez sonrası ancak 'nın nitroselüloz membrana transferi öncesinde, jel seyreltik sodyum hidroksit () içeren alkali bir çözelti ile muamele edilir. Bu aşamada uygulanan alkali muamelenin temel amacı aşağıdakilerden hangisidir?
- Çift zincirli moleküllerini tek zincir haline getirerek prob ile hibridizasyona olanak sağlamakAnswer
- Bmoleküllerini daha küçük parçalara ayırarak membrana transfer hızını artırmak
- CElektroforez sırasında kullanılan asidik tampon çözeltiyi nötralize ederek jeli nötr 'a getirmek
- DNitroselüloz membranın moleküllerine olan bağlanma afinitesini kimyasal olarak artırmak
Answer
Alkali muamelenin temel amacı, çift zincirli 'yı denatüre ederek probun hedef diziye bağlanabileceği (hibridizasyon) tek zincirli yapıyı oluşturmaktır.
Southern Blotting tekniğinde amaç, spesifik bir dizisini saptamaktır. Jeldeki çift zincirli , alkali () muamele ile denatüre edilerek tek zincirli hale getirilir. Bu işlem, membrana transfer edildikten sonra ilave edilecek olan tek zincirli radyoaktif veya floresan işaretli probun, hedef diziyle hidrojen bağları kurarak eşleşmesini (hibridizasyon) mümkün kılar.
Step-by-Step Solution
Key Concept
Southern Blotting'de denatürasyon basamağı, probun hedef nükleik asit dizisine spesifik olarak bağlanabilmesi (hibridizasyon) için zorunludur.
Alternative Method
Northern Blotting yönteminde (RNA analizi), RNA zaten doğal olarak tek zincirli olduğu için transfer öncesi bu tip kuvvetli alkali bir denatürasyon basamağına genellikle ihtiyaç duyulmaz; ancak RNA'nın ikincil yapılarını bozmak için formaldehit gibi ajanlar jel hazırlığında kullanılır.
Estimated Time:1m 30s