Bir laboratuvarda saflaştırılmak istenen ve izoelektrik noktaları () sırasıyla , , ve olan dört farklı proteinden oluşan bir karışım, değeri olarak ayarlanmış bir tampon sisteminde Karboksimetil (CM)-selüloz kolonuna yükleniyor. Bu kromatografi işlemi sonucunda, kolon matrisine en güçlü şekilde bağlanması beklenen proteinin izoelektrik noktası () hangisidir?
- A
- B
- C
- Answer
Answer
İzoelektrik noktası olan protein, pH ortamında en yüksek net pozitif yüke sahip olduğu için negatif yüklü CM-selüloz kolonuna en güçlü şekilde bağlanır.
İzoelektrik noktası olan proteinin doğru cevap olmasının nedeni, olan ortamda bu proteinin en yüksek net pozitif yüke sahip olmasıdır (). Karboksimetil (CM)-selüloz bir katyon değiştiricidir ve fonksiyonel grupları negatif yüklüdür. Bu nedenle, karışımda bulunan ve net pozitif yükü en fazla olan protein matrise en güçlü şekilde tutunur.
Step-by-Step Solution
Key Concept
İyon değişim kromatografisinde proteinin bağlanma gücü, ortam pH'ı ile proteinin izoelektrik noktası () arasındaki farktan kaynaklanan net elektriksel yük miktarına bağlıdır.
Hints
1
CM-selülozun bir katyon değiştirici olduğunu ve negatif yüklü bir matrise sahip olduğunu hatırlayın.
2
Bir proteinin matrise bağlanabilmesi için matrisin tersi yüke sahip olması gerekir; yani bu soruda proteinin net pozitif yüklü olması şarttır.
3
olduğunda proteinlerin pozitif yüklü olduğunu ve pI ile pH arasındaki fark arttıkça net yükün de arttığını düşünün.
Practice More
DEAE-selüloz gibi anyon değiştiricilerde aynı pI değerlerine sahip proteinlerin nasıl bir elüsyon sırası izleyeceğini çalışmak konuyu pekiştirecektir.
Alternative Method
Proteinlerin yük durumunu hızlıca görselleştirmek için bir sayı doğrusu çizin. pH 7.0'ı merkeze koyun; pI değeri 7.0'ın sağında kalanlar pozitif, solunda kalanlar negatiftir. Sağda en uçta kalan () en güçlü bağlanan olacaktır.
Estimated Time:1m 30s