Orak hücreli anemiye yol açan nokta mutasyonu (-globin geninde amino asitte gerçekleşen değişimi), ilgili DNA dizisindeki restriksiyon enziminin tanıma bölgesini bozmaktadır. Moleküler tanı amacıyla, hastadan alınan DNA örneğinin ilgili bölgesi PCR ile çoğaltılmış ve ardından enzimi ile kesilmiştir (RFLP analizi). Normal allelden köken alan uzunluğundaki PCR ürünü, enzimle kesildiğinde ve büyüklüğünde iki fragman oluşturmaktadır.
Buna göre, heterozigot bir taşıyıcının jel elektroforezi analizi sonucunda aşağıdaki bantlardan hangilerinin gözlenmesi beklenir?
- , ve Cevap
- BSadece
- Cve
- Dve
Cevap
Heterozigot bir taşıyıcıda hem sağlam hem de mutasyonlu allel bir arada bulunduğu için jelde (kesilmemiş mutant allel), ve (kesilmiş normal allel) olmak üzere toplam üç bant gözlenir.
Orak hücreli anemide mutasyon sonucunda bölgesinin kaybı, mutant allelin kesilmesini imkansız kılar. Heterozigot birey hem bir sağlam allel (kesilerek ve bantlarını oluşturur) hem de bir mutant allel (kesilmeden olarak kalır) taşıdığı için jelde bu üç farklı boyuttaki bandın hepsinin bir arada görülmesi gerekir.
Adım Adım Çözüm
Anahtar Kavram
RFLP (Restriksiyon Fragment Uzunluk Polimorfizmi) analizi ve heterozigot bireylerde bant paterninin yorumlanması.
İpuçları
1
Heterozigot bireylerin her iki gen kopyasını (allelini) da taşıdığını unutmayın.
2
Normal allelin enzimle kesildiğinde kaç parça, mutant allelin ise kaç parça oluşturduğunu ayrı ayrı hesaplayın.
3
Mutasyon kesim bölgesini bozduğu için mutant allel olarak kalırken, normal allel ve olarak parçalanır; heterozigotta bunların hepsini görürsünüz.
Daha Fazla Pratik
Restriksiyon enzimlerinin tanıma bölgelerinin palindromik diziler olduğunu ve nokta mutasyonlarının bu dizileri nasıl bozabileceğini gözden geçirin.
Tahmini Süre:1m 30s