Soru

Zorluk: OrtaMoleküler Genetik Teknikler

Bir genin belirli bir bölgesindeki tek nükleotid değişikliğinin (SNPSNP), o bölgeyi tanıyan bir restriksiyon enziminin kesim bölgesini ortadan kaldırdığı bilinmektedir. Bir bireyde bu spesifik genetik varyasyonun varlığını ve bireyin bu bölge açısından homozigot veya heterozigot olup olmadığını genomik DNADNA kullanarak belirlemek için en uygun moleküler teknik aşağıdakilerden hangisidir?

  1. Restriksiyon parça uzunluk polimorfizmi (RFLPRFLP)Cevap
  2. B
    Western Blot analizi
  3. C
    Northern Blot analizi
  4. D
    Ters transkripsiyon PCR (RTPCRRT-PCR)

Cevap

Restriksiyon parça uzunluk polimorfizmi (RFLPRFLP), DNA dizisindeki değişikliklerin restriksiyon enzimlerinin kesim bölgelerini etkilemesi prensibiyle çalışır ve genomik DNA analizinde en uygun yöntemdir.
Doğru yanıt olan yöntem (RFLPRFLP), restriksiyon enzimlerinin DNA üzerindeki spesifik tanıma dizilerine bağlanıp kesmesi prensibine dayanır. Eğer bir nükleotid değişimi bu diziyi bozarsa veya yeni bir dizi oluşturursa, kesim sonrası oluşan DNADNA parçalarının boyutu değişir. Bu durum jel elektroforezinde farklı bant paternleri olarak gözlenir ve hem mutasyonun varlığını hem de bireyin zigotluk durumunu (tek bant veya çift bant paterni ile) kesin olarak gösterir.

Adım Adım Çözüm

1
Genomik DNA'nın izolasyonu ve hedef bölgenin belirlenmesi.
Analiz edilecek ham genetik materyal elde edilir.
Varyasyonun bulunduğu bölgenin analizi için başlangıç materyali gereklidir.
2
DNA'nın spesifik restriksiyon enzimleri ile inkübe edilmesi (sindirilmesi).
Mutasyonun varlığına bağlı olarak farklı uzunluklarda DNA parçaları oluşur.
Enzim, tanıma bölgesi değişmişse kesim yapamaz veya yeni bir bölge oluşmuşsa fazladan kesim yapar.
3
Oluşan parçaların agaroz jel elektroforezi ile ayrıştırılması.
Parça uzunluklarına göre jel üzerinde karakteristik bant profilleri oluşur.
Elektriksel alanda küçük parçalar daha hızlı hareket ederek büyük parçalardan ayrılır.
4
Bant profillerinin homozigot ve heterozigot kontrollerle karşılaştırılması.
Bireyin genetik durumu (mutant/yabanıl tip) netleşir.
Heterozigot bireylerde hem kesilen hem de kesilmeyen allellere ait bantlar bir arada görülür.

Anahtar Kavram

DNA sekansındaki tek nükleotid değişimlerinin restriksiyon enzim profili üzerinden analizi (RFLPRFLP).
Tahmini Süre:1m 30s
Bu soruyu puanla