Examkin

Soru

Zorluk: OrtaMoleküler Genetik Teknikler

DNA dizilemesinde yaygın olarak kullanılan Sanger (zincir sonlanma) yönteminde, sentezlenmekte olan DNA zincirine dahil edildiğinde polimerizasyonun durmasına ve zincirin uzatılamamasına neden olan molekül aşağıdakilerden hangisidir?

  1. A
    2′−deoksinu¨kleotid2'-deoksinükleotid trifosfattrifosfat (dNTP)(dNTP)
  2. 2′,3′−dideoksinu¨kleotid2',3'-dideoksinükleotid trifosfattrifosfat (ddNTP)(ddNTP)Cevap
  3. C
    5′−fosfat5'-fosfat grubu içermeyen ribonükleotidler
  4. D
    DNA ligaz enzimi

Cevap

Sanger dizileme yönteminde zincir sonlanmasına neden olan moleküller 2′,3′−dideoksinu¨kleotid2',3'-dideoksinükleotid trifosfattrifosfat (ddNTPddNTP)'lardır.
Doğru seçenek olan nükleotid türü, şeker yapısındaki 3′3' karbonunda hidroksil grubu (OHOH) taşımamaktadır. DNA polimeraz, bir nükleotidi zincire eklerken önceki nükleotidin 3′−OH3'-OH grubu ile yeni nükleotidin 5′−fosfat5'-fosfat grubu arasında bağ kurar. Bu gruptan yoksun olan modifiye nükleotid zincire dahil edildiğinde, kendisinden sonra gelen nükleotid için bağlanma bölgesi sağlayamaz ve polimerizasyon reaksiyonu o noktada durur.

Adım Adım Çözüm

1
DNA polimerizasyon mekanizmasını incele.
Normal bir DNA sentezinde, yeni gelen nükleotidin 5′−fosfat5'-fosfat grubu, mevcut zincirin sonundaki nükleotidin 3′−hidroksil3'-hidroksil (3′−OH3'-OH) grubuyla fosfodiester bağı kurar.
Zincir uzaması için serbest bir 3′−OH3'-OH grubu zorunludur.
2
ddNTPddNTP molekülünün yapısını analiz et.
ddNTPddNTP molekülleri hem 2′2' hem de 3′3' pozisyonunda hidroksil grubu içermezler (2′,3′−dideoksi2',3'-dideoksi).
3′−OH3'-OH grubunun yokluğu, bir sonraki nükleotidin bağlanabileceği kimyasal bölgeyi ortadan kaldırır.
3
Reaksiyon sonucunu belirle.
DNA polimeraz zincire bir ddNTPddNTP eklediğinde, sentez o noktada durur.
Zincir sonlanması (chain termination) gerçekleşerek farklı uzunluklarda DNA parçaları oluşur.

Anahtar Kavram

Sanger Dizileme ve Zincir Sonlanma Mekanizması

İpuçları

1
DNA sentezinin devam etmesi için nükleotidlerin hangi karbon atomundaki grubun serbest olması gerektiğini hatırlayın.

Daha Fazla Pratik

Sanger yöntemi ile yeni nesil dizileme (NGS) yöntemleri arasındaki temel farkları gözden geçirebilirsiniz.
Tahmini Süre:1m 0s
Bu soruyu puanla

Konular

Moleküler Genetik Teknikler

Bu konudan daha fazla soru