Biyokimya laboratuvarında proteinlerin saflaştırılması ve analizinde yaygın olarak kullanılan SDS-PAGE (Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforezi) yönteminde, proteinlerin doğal yüklerinden bağımsız olarak sadece molekül ağırlıklarına (boyutlarına) göre ayrılabilmesini sağlayan temel mekanizma aşağıdakilerden hangisidir?
- Proteinlerin SDS ile kaplanarak her birinin yaklaşık aynı kütle/yük oranına sahip negatif yüklü komplekslere dönüşmesiCevap
- BOrtama eklenen 2-merkaptoetanolün peptid bağlarını hidrolize ederek proteinleri serbest amino asit birimlerine parçalaması
- CProteinlerin bir pH gradiyenti boyunca göç ederek elektriksel olarak nötr oldukları izoelektrik noktalarda (pI) durmaları
- DBüyük moleküllü proteinlerin jel matrisindeki gözeneklerden küçük moleküllere göre daha kolay ve hızlı geçerek anoda ulaşması
- EAnaliz edilecek proteinlerin ninhidrin çözeltisi ile ısıtılarak menekşe renkli kompleksler oluşturması sonucu ayrışması
Cevap
Proteinlerin SDS ile kaplanarak yaklaşık aynı kütle/yük oranına sahip negatif yüklü komplekslere dönüşmesi sayesinde ayrım sadece molekül ağırlığına göre gerçekleşir.
Doğru seçenekte belirtildiği üzere; SDS, proteinlerin hidrofobik bölgelerine bağlanarak onları denatüre eder ve her amino asit için sabit miktarda negatif yük kazandırır. Bu durum, proteinlerin kendine özgü izoelektrik noktalarını ve doğal yüklerini geçersiz kılarak tüm proteinlerin negatif kutuptan pozitif kutba doğru sadece boyutlarına (molekül ağırlıklarına) göre göç etmesini sağlar.
Adım Adım Çözüm
Anahtar Kavram
SDS-PAGE'de anyonik deterjan olan SDS'nin proteinlerin doğal yükünü maskelemesi ve kütle/yük oranını sabitleyerek ayrımı molekül ağırlığına indirgemesi.