Examkin

Soru

Zorluk: OrtaProtein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Bir biyokimya laboratuvarında saflaştırılan ve özellikleri aşağıda verilen üç farklı protein içeren bir karışım bulunmaktadır:

Proteinİzoelektrik Nokta (pIpI)
Protein A5.25.2
Protein B7.07.0
Protein C8.88.8

Bu protein karışımı, pH 7.57.5 değerindeki bir tampon çözelti içerisinde DEAE-selüloz (anyon değiştirici) kolonuna uygulanmıştır.

Buna göre, bu proteinlerin kromatografi kolonundaki davranışları ile ilgili aşağıdaki ifadelerden hangisi doğrudur?

  1. pH 7.57.5 ortamında Protein C net pozitif yüklü olduğu için kolona bağlanmaz ve en önce elüe olur.Cevap
  2. B
    Protein A, kolon matrisine en zayıf bağlanan proteindir çünkü pI değeri ortam pH'ına en uzaktır.
  3. C
    DEAE-selüloz bir katyon değiştiricidir ve net pozitif yüklü proteinleri bağlamak için kullanılır.
  4. D
    pH 7.57.5 değerinde Protein B net negatif yüklü olduğu için kolona bağlanmadan çıkar.
  5. E
    Bağlı proteinleri kolondan ayırmak için kullanılan tamponun pH değeri 9.59.5 seviyesine yükseltilmelidir.

Cevap

pH 7.57.5 ortamında Protein C net pozitif yüklü olduğu için kolona bağlanmaz ve en önce elüe olur.
Anyon değiştirici kromatografide (DEAE-selüloz gibi), matris pozitif yüklüdür ve negatif yüklü proteinleri tutar. Bir proteinin ortam pH'ı kendi izoelektrik noktasından (pIpI) düşükse (pH < pI), o protein net pozitif yük taşır. Sorumuzdaki Protein C'nin pI değeri (8.88.8), ortam pH'ından (7.57.5) yüksek olduğu için bu protein net pozitif yükle yüklenir. Aynı yüklü olan matris ve protein birbirini iteceği için Protein C kolona bağlanmaz ve en önce çıkar.

Adım Adım Çözüm

1
Kolon tipini analiz etme
DEAE-selüloz bir anyon değiştiricidir. Matrisi pozitif yüklüdür ve negatif yüklü (anyonik) proteinleri bağlar.
Proteinlerin ayrılma mekanizmasını anlamak için matrisin yükü bilinmelidir.
2
Proteinlerin ortam pH'ındaki net yüklerini belirleme
Protein A (pI=5.2<pH=7.5pI=5.2 < pH=7.5) →\rightarrow Negatif; Protein B (pI=7.0<pH=7.5pI=7.0 < pH=7.5) →\rightarrow Negatif; Protein C (pI=8.8>pH=7.5pI=8.8 > pH=7.5) →\rightarrow Pozitif.
Bir proteinin net yükü, ortam pH'ı ile kendi izoelektrik noktası (pIpI) arasındaki ilişkiye bağlıdır.
3
Bağlanma ve elüsyon sırasını belirleme
Negatif yüklü A ve B proteinleri kolona bağlanır. Pozitif yüklü C proteini ise matris tarafından itilir ve bağlanmadan ilk sırada elüe olur.
Aynı yüklü moleküller birbirini iter, zıt yüklü moleküller birbirini çeker.

Anahtar Kavram

İyon Değişim Kromatografisi ve pI İlişkisi
Tahmini Süre:1m 30s
Bu soruyu puanla

Konular

Protein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Bu konudan daha fazla soru