Examkin

Soru

Zorluk: ZorProtein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Proteinlerin saflaştırılması ve yapısal özelliklerinin analizi amacıyla laboratuvar ortamında uygulanan kromatografik, elektroforetik ve kimyasal tekniklerin temel prensipleri dikkate alındığında, aşağıdaki ifadelerden hangisi doğrudur?

  1. A
    İzoelektrik noktası (pIpI) 5.55.5 olan bir proteinin, pHpH 7.47.4 değerindeki bir tampon ortamında Karboksimetil (CM)-Selüloz gibi bir katyon değiştirici reçineye güçlü bir şekilde bağlanması beklenir.
  2. B
    Jel filtrasyon kromatografisinde, moleküler ağırlığı kolondaki gözenekli boncukların dışlama sınırından (exclusion limit) daha büyük olan proteinler, gözeneklerin içine hapsoldukları için kolonu en geç terk eden gruptur.
  3. Proteinlerin amino asit diziliminin belirlenmesinde kullanılan Edman bozunması yönteminde; fenilizotiyosiyanat (PITCPITC), polipeptid zincirinin serbest amino grubu (NN-terminal) ile reaksiyona girerek diğer peptid bağlarını koparmadan sadece terminal amino asidi ayırır.Cevap
  4. D
    SDS−PAGESDS-PAGE uygulamasında, sodyum dodesil sülfat (SDSSDS) proteinlerin disülfit bağlarını indirgeyerek onları alt birimlerine ayırır ve polipeptid zincirlerine kütleleri ile ters orantılı bir net pozitif yük kazandırır.
  5. E
    Ultrasantrifüj yönteminde proteinlerin çökelme hızı ve buna bağlı olarak belirlenen Svedberg birimi (SS), sadece proteinin moleküler ağırlığına bağlıdır; proteinin şekli ve yoğunluğu bu değeri etkilemez.

Cevap

Protein sekans analizinde kullanılan Edman bozunması yönteminde fenilizotiyosiyanat, polipeptidin N-terminal amino grubu ile reaksiyona girerek sadece terminal amino asidi peptid zincirinin kalanına zarar vermeden feniltiyohidantoin (PTH) türevi olarak ayırır.
Edman bozunması yöntemi, proteinlerin birincil yapısını analiz etmek için tasarlanmış oldukça spesifik bir tekniktir. Fenilizotiyosiyanat (PITCPITC) reaktifi, polipeptidin sadece NN-uç amino asidi ile reaksiyona girer ve asidik ortamda bu amino asidi PTH türevi olarak koparır. Bu işlem sırasında diğer peptid bağları hidrolize uğramadığı için polipeptid zinciri basamak basamak dizilenebilir.

Adım Adım Çözüm

1
Edman bozunması mekanizmasını incele.
Fenilizotiyosiyanat (PITCPITC), bazik ortamda polipeptidin serbest α\alpha-amino grubu ile birleşerek feniltiyokarbamoil türevi oluşturur.
Bu adım, polipeptidin ilk amino asidini işaretlemek için gereklidir.
2
Terminal amino asidin ayrılma sürecini değerlendir.
Susuz asit ilavesiyle (trifloroasetik asit), işaretlenen N-terminal amino asit siklik bir PTH-amino asit türevi olarak ayrılır.
Asidik koşullar, peptid bağlarının genel hidrolizine neden olmadan sadece terminaldeki işaretlenmiş bağı koparır.
3
Yöntemin sürdürülebilirliğini kontrol et.
Geriye kalan polipeptid zinciri bir amino asit kısalmış halde sağlam kalır ve yeni bir analiz döngüsüne girer.
Bu özellik, yöntemin otomatik sekans analizörlerinde kullanılmasını sağlar.

Anahtar Kavram

Protein dizileme teknikleri ve kromatografik ayırma prensipleri
Tahmini Süre:2m 0s
Bu soruyu puanla

Konular

Protein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Bu konudan daha fazla soru