Soru

Zorluk: OrtaMoleküler Genetik Teknikler

Moleküler biyoloji laboratuvarında çalışan bir biyokimyacı, bir hastadan alınan kas biyopsisi örneğinde distrofin proteininin varlığını ve moleküler ağırlığını değerlendirmek amacıyla Western Blot yöntemini tercih etmiştir.

Bu yöntemle ilgili olarak aşağıda verilen ifadelerden hangisi doğrudur?

  1. A
    Proteinlerin moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılması için genellikle agaroz jel elektroforezi kullanılır.
  2. B
    Hedef proteini saptamak amacıyla radyoaktif veya floresan işaretli DNADNA probları kullanılır.
  3. Spesifik proteini tanımak ve belirlemek amacıyla primer ve sekonder antikorlardan yararlanılır.Cevap
  4. D
    Bu yöntem, hücredeki mRNAmRNA ekspresyon düzeylerini ölçmek için kullanılan en yaygın tekniktir.

Cevap

Spesifik proteini tanımak ve belirlemek amacıyla primer ve sekonder antikorlardan yararlanılması doğrudur.
Doğru ifade, spesifik proteini tanımak amacıyla primer ve sekonder antikorların kullanılmasıdır. Western Blot (immünoblot), proteinlerin elektroforetik olarak ayrılmasından sonra antikorlar aracılığıyla tespit edildiği temel moleküler tekniktir.

Adım Adım Çözüm

1
Proteinlerin denatürasyonu ve ayrıştırılması
Proteinlerin SDSSDS ile negatif yüklenmesi ve SDSPAGESDS-PAGE ile moleküler ağırlıklarına göre bantlara ayrılması
Hücre içindeki karmaşık protein karışımının analiz edilebilir hale getirilmesi gerekir.
2
Blotting (Transfer)
Protein bantlarının jelden nitroselüloz veya PVDF membranı üzerine aktarılması
Jel üzerindeki proteinlerin antikorlarla etkileşime girmesi teknik olarak zor olduğu için daha dayanıklı bir yüzeye aktarılması gerekir.
3
İmmünolojik saptama
Hedef proteine primer antikorun bağlanması ve ardından enzim işaretli sekonder antikorun eklenmesi
Sinyal amplifikasyonu ve hedef proteinin spesifik olarak görüntülenmesi bu basamakla sağlanır.

Anahtar Kavram

Western Blot (İmmünoblot) yöntemi, antikor-antijen etkileşimi kullanarak spesifik proteinlerin saptanması ve miktar tayini için kullanılır.

Daha Fazla Pratik

Western Blot ile protein ekspresyonu bakılırken, Northern Blot ile mRNA ekspresyonu arasındaki farkın klinik araştırmalardaki önemini inceleyebilirsiniz.
Tahmini Süre:1m 30s
Bu soruyu puanla